Desenvolvimento de biomarcadores para avaliação dos efeitos disruptores endócrinos da exposição a ambiente vulcânico usando a glândula suprarrenal de Mus musculus

Dissertação de Mestrado, Ambiente, Saúde e Segurança, 29 de janeiro de 2019, Universidade dos Açores.As populações que vivem em áreas de vulcanismo ativo estão expostas aos poluentes emitidos pela desgaseificação difusa dos solos. Este estudo tem como principal objetivo avaliar as alterações histológicas na glândula suprarrenal de ratinhos (Mus musculus) decorrentes da exposição ao ambiente vulcânico. Para alcançar este objetivo foram recolhidos 8 ratinhos expostos ao ambiente vulcânico (grupo exposto) e 23 ratinhos recolhidos em Rabo de Peixe (grupo controlo), nos quais foram estudados os seguintes parâmetros histológicos da suprarrenal: a área e o perímetro totais da suprarrenal; a área e o perímetro do córtex, e a espessura das diferentes zonas constituintes do córtex (zona glomerulosa, zona fasciculada e zona reticulada); e, a área, o perímetro e o diâmetro da medula. Tendo em conta os resultados obtidos para a idade verificou-se que os ratinhos do grupo exposto são significativamente mais velhos, o que implica mais tempo de exposição ao ambiente vulcânico, o que poderá resultar em fadiga cortical. Na medula adrenal, os resultados obtidos refletem que a exposição ao ambiente vulcânico não resultou em alterações histológicas significativas dos parâmetros analisados. Assim, as diferenças encontradas nos valores de área e perímetro da suprarrenal devem-se às alterações verificadas no córtex adrenal. Analisando as três zonas do córtex, comparando o grupo controlo com o grupo exposto, é possível depreender que, para a zona glomerulosa, não existem diferenças significativas ao nível da sua espessura. Relativamente à zona fasciculada e à zona reticulada, estas apresentaram uma redução significativa de espessura no grupo exposto comparativamente ao grupo controlo. Os ratos das Furnas estão permanentemente expostos a uma atmosfera bastante rica em CO₂ (hipercapnia) e pobre em O₂ (hipoxia). Os resultados obtidos poderão encontrar explicação na exposição crónica a um ambiente bastante rico em CO₂, a qual poderá produzir uma redução dos níveis de ansiedade e de stress (devido ao efeito relaxante deste gás) com a concomitante redução da solicitação do córtex adrenal e, consequentemente, à sua atrofia. Outra hipótese para explicar os resultados obtidos é a ocorrência de hipocortisolismo, devido à redução da produção de cortisol na zona fasciculada como consequência de uma exposição crónica ao stress ambiental, resultando num quadro de fadiga adrenal por excesso de estimulação da glândula sem que nunca se consiga atingir um equilíbrio. Com base nos resultados obtidos pode concluir-se que, para além de o Mus musculus ser um bom bioindicador para a biomonitorização dos efeitos do vulcanismo, a espessura do córtex, e em particular da zona fasciculada, constituem bons biomarcadores de exposição.ABSTRACT: Populations that live around active volcanic areas are more exposed to pollutants emitted from soil degassing. The main objective of this study is to evaluate the histological changes in adrenal gland of mice (Mus musculus) exposed to a volcanic environment. To achieve this goal, 8 mice exposed to the volcanic environment and 23 mice from Rabo de Peixe (control group) were colleted, in which the following histological parameters of the adrenal were studied: the total area and perimeter of the adrenal gland; area and perimeter of cortex; the thickness of the different layers of the córtex (zona glomerulosa, zona fasciculata and zona reticularis); area, perimeter and diameter of the adrenal medulla. The results show that mice exposed to the volcanic environment (exposed group) are significantly older, and therefore have been longer exposed to the volcanic environment, which may have resulted in cortical fatigue. Nevertheless, the results obtained reflect that the exposure to the volcanic environment did not result in significant alterations of the adrenal medulla. Thus, the differences found in the adrenal area and perimeter values are due to changes in the adrenal cortex. The analysis of the three layers of the cortex showed that there were no significant differences in the thickness of zona glomerulosa between the studied groups. Both zona fasciculata and zona reticularis presented a significant reduction of their thickness in the exposed group when compared to the control group. Furnas mice are permanently exposed to an atmosphere rich in CO₂ (hypercapnia) and poor in O₂ (hypoxia). These results may be explained by the chronic exposure to an environment rich in CO₂: due to the relaxing effect of this gas, such exposure probably produced a reduction in anxiety and stress levels resulting in a reduction of the adrenal cortex and, consequently, its atrophy. Another explanation for the obtained results, may be the occurrence of hypocortisolism, i.e., the reduction of cortisol production by the zona fasciculata. This situation may be due to chronic exposure to environmental stress, resulting in adrenal fatigue due to the over stimulation of the cortex without ever being able to reach a balance. Based on the results, we can conclude that, Mus musculus is a good bioindicator for the biomonitoring of the effects of volcanism, being the thickness of the cortex, and in particular the zona fasciculata, effective biomarkers of exposure

Biorecognition by amino acid-based affinity chromatography for RNA purification

Following the decoding of the human genome, a new era was opened for developing new gene therapy strategies employing nucleic acids. Recently, RNA was renowned a central molecule in cellular processes with implications in many diseases as well as in understanding of evolution, becoming one of the most exciting research areas of molecular biology. From basic to applied research, many procedures employ pure and intact RNA molecules. On one hand, RNA purification is a first critical step of a number of molecular biology procedures and its quality is crucial to ensure reproducibility and biological relevance of an experiment. On the other hand, the promising and revolutionary RNA-based therapies of RNA vaccination, gene therapy or recombinant biopharmaceuticals involves RNA formulations which should fulfill rigorous quality criteria recommended by international regulatory agencies. However, the isolation and purification of RNA are critical steps because of the easy degradability of RNA, which can impair chemical stability and biological functionality essential for analysis. Many techniques have been development to overcome the challenges of purifying RNA molecules; nonetheless they still have several limitations in regard to time demanding and the requirement of toxic solvents and denaturing conditions. Therefore, there is a growing demand for the evaluation and improvement of the methodologies currently used for RNA isolation and purification. Chromatography is undoubtedly one of the most diverse and potent methods in biotechnology, both at analytical, preparative and industrial level due to its simplicity, robustness, versatility and high reproducibility. Affinity chromatography is recognized as a powerful technique with great applicability in the purification of many biomolecules, including plasmid DNA and proteins because it exploits the principle of biomolecular recognition. The work that we have been developing considers new chromatographic strategies for RNA purification, using amino acids as affinity ligands. These studies are based on the fact that many different interactions exist between proteins and nucleic acids in biological systems, involving in particular basic amino acids such as histidine or arginine. New methodologies were accomplished that allowed obtaining RNA preparations from different sources with high recovery yields, purity and integrity. A new analytical method for RNA quantification was also developed in this work. The applicability of histidine-based affinity chromatography in the purification of RNA molecules was first demonstrated in the separation of 6S RNA, a regulatory non-coding RNA of the prokaryotic Escherichia coli (E.coli). A specific recognition between the histidine support and 6S RNA allowed its selective purification from a complex mixture of other small RNAs (sRNA). In another strategy, the simultaneous isolation of sRNA and ribosomal RNA from E.coli cell lysates, eliminating host DNA and proteins, was also attained by a histidine chromatographic-based method. Furthermore, arginine matrix was employed in RNA purification from eukaryotic cells demonstrating an exceptional ability to interact with all functional classes of RNA, despite their structural diversity and different folding states, enabling their isolation from impurities of eukaryotic crude cell extracts. Moreover, an analytical technique based on arginine affinity support for quantification and quality assessment of total RNA from different eukaryotic cells and synthetic RNA samples was also developed and validated, according to international and European legislation for bioanalytical methods. More efforts into RNA purification were developed with amino acid-based matrices, in particular with arginine-agarose matrix, in order to approach this technique to therapeutic application of RNA. The new goal was to exploit its applicability in purifying messenger RNA (mRNA) molecules not from cells, but from synthetic crudes of in vitro transcription reactions, pursuing mRNA vaccination for cervical cancer. In this work, arginine-based chromatography also showed its singular capability to improve purification processes, showing the advantages of eliminating additional steps and improving global economics of the production process. The development of these new methodologies revealed several interesting characteristics of RNA molecules, including their chromatographic behavior and natural interactions that can occur between amino acids-based supports and RNA molecules. Accordingly, these methods demonstrated a potential multipurpose applicability by aiding in molecular biology RNA-based analysis and RNA therapeutics, which support the interest in applying amino acid-based affinity chromatography for the future development of new RNA isolation, purification and quantification processes.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT

"Sexual and reproductive health in type 1 diabetes mellitus" : an exploratory approach to emerging adults' perceptions

Tese de mestrado, Psicologia (Secção de Psicologia Clínica e da Saúde, Núcleo de Psicologia Clínica da Saúde e da Doença), Universidade de Lisboa, Faculdade de Psicologia, 2017A Diabetes Mellitus (DM) é uma das doenças crónicas com maior incidência e prevalência a nível mundial. Entre os diferentes tipos de diabetes, a Diabetes Mellitus Tipo 1 (DMT1) é a forma de diabetes que, na grande maioria dos casos, é diagnosticada antes da entrada na idade adulta e que acompanha o indivíduo ao longo de toda a sua vida. A longo-prazo, a DMT1, aliada ao avançar da idade, ao número de anos de diagnóstico e a um controlo glicémico desadequado, pode desencadear o aparecimento de complicações, entre as quais problemas ao nível da saúde sexual e/ou reprodutiva. O período de transição da adolescência para a entrada na vida adulta é caracterizado por marcos desenvolvimentistas ao nível da sexualidade, exploração da identidade, independência financeira, formação de vínculos afetivos e sexuais que tendem a ser mais estáveis e da tomada de decisões face a planos de vida futuros. No curso do desenvolvimento humano, o aparecimento de uma doença crónica, constitui por si só um fator que tem impacto em diferentes áreas do desenvolvimento individual, desencadeando períodos de crise que podem interferir com as tarefas de desenvolvimento normativas desta fase da vida. Neste sentido, os adultos emergentes com DMT1 enfrentam exigências adicionais associadas à gestão da sua condição de saúde crónica e ao aparecimento das possíveis complicações a longo-prazo. De acordo com os modelos da Psicologia da Saúde, a forma como um indivíduo perceciona e representa, tanto a doença como os desafios que esta impõe vai determinar as suas respostas e comportamentos de saúde, interferindo com o seu bem-estar, qualidade de vida e processo de desenvolvimento global adaptativo. A conjugação de conhecimentos destes dois domínios de investigação, Psicologia do Desenvolvimento e da Saúde, cria os pressupostos teóricos que sustentam a necessidade de explorar se a sexualidade e a função sexual são, ou não, afetadas pelas perceções e experiências da DMT1, numa fase da vida que envolve inúmeras transições sociais. Assim, para além dos estudos que têm sido desenvolvidos para compreender o efeito da componente biológica da DMT1 no funcionamento sexual, interessa explorar as implicações psicológicas e interpessoais que problemas ao nível da saúde sexual e reprodutiva podem despoletar nos adultos emergentes, bem como nas suas relações românticas. A escassez de literatura que explore o desenvolvimento social e sexual de adultos emergentes com DMT1, não permite compreender as perceções, expectativas e experiências face à relação entre a vivência com a doença crónica e a experiência da sexualidade num período-chave de transição, como é a entrada na vida adulta. A presente investigação surge, assim, com o objetivo de contribuir de forma significativa, ainda que preliminar e modesta, para a compreensão de aspetos pouco explorados face à vivência e perceção das relações românticas e da saúde sexual e reprodutiva por parte de adultos emergentes com DMT1, dando-lhes voz no que diz respeito às suas expectativas e experiências a estes níveis, de forma a proporcionar aos profissionais de saúde e à comunidade um maior conhecimento sobre a forma como vivem as relações românticas, a sexualidade e a vida reprodutiva. De forma a alcançar os objetivos propostos foi desenvolvido um estudo exploratório qualitativo, com uma amostra de adultos emergentes (n = 59), com idades entre os 18 e os 35 anos (M = 26,66, DP = 4,74), que falam Português e com diagnóstico de DMT1. Os participantes responderam a um questionário online com três questões de resposta aberta. A estrutura das questões progride de um espetro mais global de abordagem ao tema, para questões mais específicas da experiência dos adultos emergentes com DMT1 no que diz respeito à sua saúde sexual e reprodutiva. Assim, considerando a literatura, que dá relevância ao impacto da doença crónica nas relações românticas de adultos emergentes, a primeira pergunta procura identificar as perceções desta população relativamente ao impacto da DMT1 na formação de relações românticas. A segunda questão procura, de forma mais específica, explorar dúvidas e/ou questões dos participantes face à sua saúde sexual e reprodutiva. Por último, a terceira questão remete para a exploração da experiência de dificuldades ao nível da saúde sexual e/ou reprodutiva, procurando identificar estratégias de respostas às quais os adultos emergentes recorrem para lidar com as mesmas. A abordagem metodológica para a análise das respostas dos participantes a cada questão foi realizada com recurso ao QSR NVivo Pro 11, através do processo de análise temática, e resultou num conjunto de temas, subtemas e códigos que foram organizados em três sistemas hierárquicos diferentes. Considerando a natureza exploratória do estudo e os objetivos propostos, embora um grande número de participantes não tenha identificado desafios específicos ou dificuldades experienciadas na sua vida sexual e/ou reprodutiva, quase todos mencionaram questões e/ou dúvidas e experiências relacionadas com este tema. Com base na análise de resultados foram identificadas dois temas representativos dos desafios específicos expressos pelos participantes: Impacto Intrapessoal (ex.: gestão das próprias expectativas, adaptação ao diagnóstico e autorevelação) e Interpessoal (ex.: compreensão por parte do parceiro, hiper e hipoglicémias e os conhecimentos do parceiro face à doença, à sua gestão e às possíveis consequências). Embora apresentados de forma separada, estes temas estão interrelacionados, partilhando o subtema impacto na saúde sexual e reprodutiva, também identificado como um desafio específico desta população. No que concerne às questões e/ou dúvidas identificadas pelos adultos emergentes, surgem preocupações face à resposta sexual, à resposta metabólica do organismo à doença e a todo o processo de planeamento familiar, desde a pré conceção ao nascimento. Por fim, as dificuldades experienciadas pelos participantes surgem ao nível da atividade sexual, alterações orgânicas a nível urogenital e reprodutivo e experiência emocional negativa, que aparecem associadas a Processos Intrapessoais (ex.: evitamento e correção da hipoglicemia) e Interpessoais (ex.: compreensão do parceiro e comunicação com este) de resposta às mesmas por parte dos adultos emergentes com DMT1. Vistos como um todo, os resultados obtidos demonstram que as relações românticas e a saúde sexual e reprodutiva constituem uma fonte de desafios, dúvidas e experiências expressas por adultos emergentes com DMT1. A possibilidade de ocorrência de hipo e hiperglicemias durante o ato sexual surge como um dado crucial identificado, que emerge como uma temática relevante nas três questões analisadas e associada a estratégias de resposta. Por outro lado, para além das questões orgânicas mencionadas, existe um conjunto de processos psicológicos que os adultos emergentes identificam como específicos e relacionados com a vivência da sua doença crónica ao nível da saúde sexual e reprodutiva. Adicionalmente, parece também existir um reportório de estratégias às quais os adultos emergentes com DMT1 recorrem para lidar com possíveis dificuldades sentidas, o que demonstra uma capacidade de adaptação face a aspetos que são considerados desafios específicos e estão muitas vezes associados a dúvidas e/ou questões identificadas por esta população. Globalmente, o conjunto de dados recolhidos neste projeto de dissertação chama a atenção para a importância da abordagem de temas da saúde sexual e reprodutiva em contextos clínicos e sociais e, como tal, realça a importância desta área como parte constituinte da formação de profissionais de saúde. Neste sentido, o presente estudo inicia uma linha de investigação que deve ser tida em conta e explorada em projetos futuros, realçando não só o papel central das relações românticas na promoção da saúde e no bem-estar dos indivíduos mas também a necessidade de modelos diádicos de investigação.Type 1 Diabetes Mellitus (T1DM) is one of the most prevalent chronic conditions in the world and is associated with the development of long-term complications such as sexual and/or reproductive health problems. However, research exploring this topic among T1DM emerging adults has been scarce. This study seeks to explore the perceptions of T1DM emerging adults regarding the impact T1DM has when establishing romantic relationships, the specific challenges, concerns and/or experienced difficulties regarding their sexual and reproductive health, as well as their responses and strategies in dealing with these issues as they occur. We present a thematic analysis of the answers to three open questions of an online qualitative exploratory survey. The participants (n = 59) were emerging adults (ages 18-35), who speak Portuguese and have a T1DM diagnosis. Our results highlight that sexual and reproductive health are important themes identified, with an impact on a personal and interpersonal level. The specific challenges reported are related with the uncertainties and difficulties experienced, mainly regarding sexual and reproductive health as well as associated organic behaviors. Hypoglycemia and hyperglycemia during the sexual activity, especially sexual intercourse, suggests a novel data that is identified as a challenge, a doubt and an experienced difficulty, but that was also associated to specific response strategies. The findings emphasize the importance of research on sexual and reproductive health among the population of T1DM emerging adults. In particular, it is essential to give more attention to the multidisciplinary approach to this population needs and to the bidirectional influence of social relationships on health, especially the role of romantic partners in promoting their partners’ health and well-being

O2/CO2-sensitive cyclic AMP-signalling pathway in peripheral chemoreceptors

RESUMO: O corpo carotídeo (CB) é um pequeno órgão sensível a variações na PaO2, PaCO2 e pH. As células tipo I (células glómicas) do corpo carotídeo, as unidades sensoriais deste órgão, libertam neurotransmissores em resposta às variações dos gases arteriais. Estes neurotransmissores atuam quer em recetores pré-sinápticos, localizados nas células tipo I, quer em recetores póssinápticos, localizados nas terminações do nervo do seio carotídeo, ou em ambos. A activação dos recetores pré-sinápticos modula a atividade do corpo carotídeo, enquanto que, a activação dos recetores pós-sinápticos, de carater excitatório, desencadeia um aumento da frequência de descarga das fibras do CSN, com subsequente despolarização dos neurónios do gânglio petroso, e posterior despolarização de um grupo específico de neurónios do centro respiratório central, desencadeando, como resposta final, hiperventilação. Estes recetores pré- e pós-sinápticos podem ser classificados em ionotrópicos ou metabotrópicos, estando os últimos acoplados a adenilatos ciclases transmembranares (tmAC). O mecanismo exato pelo qual as variações dos gases arteriais são detetadas pelo CB não se encontra ainda completamente elucidado, mas tem sido sugerido que alterações nos níveis de cAMP estejam associadas ao mecanismo de deteção de variações de O2 e CO2. Os níveis de cAMP podem ser regulados através da sua via de síntese, mediada por dois tipos de adenilatos ciclases: tmAC sensível aos eurotransmissores e adenilato ciclase solúvel (sAC)sensível a variações de HCO3/CO2, e pela sua via de degradação mediada por fosfodiesterases. A via de degradação do cAMP pode ser manipulada farmacologicamente, funcionando enquanto alvo terapêutico para o tratamento de patologias do foro respiratório (e.g. asma, hipertensão pulmonar, doença pulmonar obstructiva crónica e apneia do sono), que induzem um aumento da actividade do CB.O trabalho descrito nesta dissertação partiu da hipótese de que a actividade do CB é manipulada por fármacos, que interferem com a via de sinalização do cAMP, tendo sido nosso objectivo geral, investigar o papel do cAMP na quimiotransdução do CB de rato, e determinar se a actividade dos enzimas responsáveis pela via de sinalização do cAMP é ou não regulada por variações de O2/CO2. Assim, a relevância deste trabalho é a de estudar e identificar possíveis alvos moleculares (sAC, isoformas de tmAC e PDE) com potencial para serem usados no tratamento de patologias relacionadas com o controlo respiratório. A primeira parte do presente trabalho, centrou-se na caracterização farmacológica da PDE4 no CB e em tecidos não quimiorecetores (e.g. gânglio cervical superior e artérias carótidas), e na observação do efeito de hipóxia aguda na acumulação dos níveis de cAMP, induzidos pelos inibidores de PDE, nestes tecidos. A quantificação de cAMP foi efectuada por técnica imunoenzimática (EIA), tendo sido elaboradas curvas de dose-resposta para os efeitos de inibidores, não específicos (IBMX) e específicos para a PDE2 e PDE4 (EHNA, Rolipram e Ro 20-1724), nos níveis de cAMP acumulados, em situações de normóxia (20%O2/5%CO2) e hipóxia (5%O2/5%CO2). A caracterização das PDE no gânglio cervical superior foi aprofundada, utilizando-se a técnica de transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET) em culturas primárias de neurónios, na presença de inibidores não específicos (IBMX) e específicos para a PDE3 e PDE4 (milrinone e rolipram, respetivamente). Foram igualmente estudadas, através de RT-qPCR, as alterações na expressão de PDE3A-B e PDE4A-D, no gânglio cervical superior, em resposta a diferentes percentagens de oxigénio. Na segunda parte do trabalho investigou-se a via de síntese do cAMP no CB em resposta a variações na concentração de HCO3/CO2. Em concreto, o protocolo experimental centrou-se na caracterização da sAC, dado que a sua actividade é regulada por variações de HCO3/CO2. A caracterização da expressão e regulação da sAC, em resposta a variações de HCO3/CO2 ,foi efectuada no CB e em tecidos não quimioreceptores periféricos (e.g. gânglio cervical superior, petroso e nodoso) por qRT-PCR. A actividade deste enzima foi caracterizada indirectamente através da quantificação dos níveis de cAMP (quantificação por EIA), induzidos por diferentes concentrações de HCO3/CO2, na presença de MDL-12,33-A, um inibidore da tmAC. A expressão das isoformas da tmAC no CB e gânglio petroso foi determinada por RT-qPCR. Adicionalmente, estudámos a contribuição relativa da tmAC e sAC no mecanismo de sensibilidade ao CO2 no CB. Para o efeito foram estudadas as alterações: 1) nos níveis de cAMP (quantificado por EIA) na presença de diferentes concentrações de HCO3/CO2 e ao longo do tempo (5-30 min); 2) na ativação da proteína cinase A (PKA, FRET baseado em sensores) em células tipo I do CB; e 3) na frequência de descarga do CSN (registos) na presença e ausência de ativadores e inibidores da sAC,tmAC e PKA. Por último, foi caracterizada a expressão e actividade da sAC nos quimioreceptors centrais (locus ceruleus, rafe e medula ventro-lateral) através de técnicas de RT-qPCR e EIA. A expressão das isoformas da tmAC foi aprofundada no locus coeruleus através de RT-qPCR. Por fim, comparámos a contribuição da tmAC e sAC nos níveis de cAMP no locus coeruleus em condições de normocapnia e hipercapnia.O nosso trabalho teve os seguintes resultados principais: 1) PDE4 está funcional no corpo carotídeo, artérias carótidas e gânglio cervical superior de rato, embora a PDE2 só se encontre funcional neste último; 2) Os efeitos dos inibidores de PDE nos níveis de acumulação de cAMP foram exacerbados em situações de hipóxia aguda no CB e artérias carótidas, mas foram atenuados no gânglio cervical superior; 3) No gânglio cervical superior, diferentes tipos de células apresentaram uma caracterização específica de PDEs, sugerindo uma subpopulação de células neste gânglio com funções fisiológicas distintas; 4) Embora todas as isoformas de PDE4 e PDE3 estivessem presentes no gânglio, a PDE3a, PDE4b e a PDE4d foram as isoformas mais expressas. Por outro lado, incubações de gânglio cervical superior, em diferentes percentagens de oxigénio, não alteraram (não regularam) significativamente a expressão das diferentes isoformas de PDE neste órgão; 5) a sAC encontra-se expressa e funcional no CB e nos quimiorecetores centrais estudados (locus coeruleus, rafe e medula ventrolateral). A sAC apresenta maior expressão no CB comparativamente aos restantes orgãos estudados, exceptuando os testículos, orgão controlo. Variações de HCO3/CO2 de 0/0 para 24/5 aumentaram os níveis de cAMP no CB e quimiorecetores centrais, tendo sido o aumento mais significativo observado no CB. Concentrações acima dos 24mM HCO3/5%CO2 não induziram alterações nos níveis de cAMP, sugerindo que a actividade da sAC se encontra saturada em condições fisiológicas (normocapnia) e que este enzima não desempenha qualquer papel na deteção de situações de hipercapnia; 6) No CB, a expressão das isoformas tmAC1, tmAC4, tmAC6 e tmAC9 é mais elevada comparativamente à expressão da sAC; 7) Utilizamos diferentes inibidores da tmAC (MDL 12-330A, 500μM, 2’5’-ddADO, 30-300μM, SQ 22536, 200μM) e da sAC (KH7, 10-100μM) para estudar a contribuição relativa destes enzimas na acumulação do cAMP no CB. Tanto a tmAC como a sAC contribuem para a acumulação dos níveis de cAMP em condições de hipercapnia. Contudo, existe um maior efeito destes inibidores nas condições de 12 mM HCO3/2.5%CO2 do que em condições de normocapnia e hipercapnia, sugerindo um papel relevante destes enzimas na atividade do CB em situações de hipocapnia; 8) Não se observaram variações nos níveis de cAMP em resposta a diferentes concentrações de HCO3/CO2 ao longo do tempo (5-30 min). O efeito inibitório induzido por ddADO e KH7 foi sobreponível após 5 ou 30 minutos de incubação em todas as concentrações de HCO3/CO2 estudadas; 9) Por último, verificou-se um aumento na frequência da descarga do nervo do seio carotídeo entre as condições de normocapnia e hipercapnia acídica. Ao contrário do KH7 (10μM), o 2’5’-ddADO reduziu significativamente a frequência de descarga do nervo, quer em condições de normocapnia quer de hipercapnia acídica. Contudo, não se verificou aumento na frequência de descarga do nervo entre normocapnia e hipercapnia isohídrica, sugerindo que a sensibilidade à hipercapnia no CB é mediada por variações de pH. Em conclusão, os resultados decorrentes deste trabalho permitiram demonstrar que, embora os enzimas que medeiam a via de sinalização do cAMP possam ser bons alvos terapêuticos em condições particulares, a sua actividade não é específica para o CB. Os resultados sugerem ainda que o cAMP não é um mediador específico da transdução à hipercapnia neste orgão. Contudo, os nossos resultados demonstraram que os níveis de cAMP são mais elevados em condições fisiológicas, o que sugere que o cAMP possa ter uma função homeostática neste orgão. Por último, o presente trabalho demonstrou que os aumentos de cAMP descritos por outros em condições de hipercapnia, não são observáveis quando o pH se encontra controlado. ------------------ ABSTRACT: The work presented in this dissertation was aimed to establish how specific is cAMP-signaling pathways in the CB mainly in different CO2 conditions and how O2 concentrations alter/drives the manipulation of cAMP signaling in the CB. The experimental studies included in this thesis sought to investigate the role of cAMP in the rat CB chemotransduction mechanisms and to determine whether the enzymes that participate in cAMP signal transduction in the CB are regulated by O2/CO2. We characterized the enzymes involved in the cAMP-signaling pathway in the CB (sAC, tmAC, PDE) under different O2/CO2 conditions. Our results demonstrated that many of these enzymes are involved in CO2/O2 sensing and while they may be useful in treating conditions with alterations in CO2/O2 sensing,they will not be specific to chemoreception within the CB: 1) PDE4 is ubiquitously expressed in CB and non-chemoreceptor related tissues and their affinity to inhibitors change with O2 tensions in both CB and carotid arteries, and 2) sAC and tmAC are expressed in peripheral and central chemo- and non-chemoreceptor tissues and their effect on cAMP levels do not change between normocapnic and isohydric hypercapnic conditions. Our results provide evidence against a specific role of cAMP as a mediator for O2 and CO2 chemotransduction in the rat CB and emphasized the role of pH in CO2 sensitivity of the CB. Furthermore, our results demonstrate that cAMP levels are maintained higher under physiological conditions, supporting recent finding from our lab, which all together suggests that cAMP has a homeostatic function in this organ

Family or firm? Why are the women the hardest hit by the pandemic economic crisis

One striking effect of the pandemic economic crisis is the disproportionate adverse impact on women. This paper explores the roots of the gender heterogenous effects, using two rich and new micro-level data bases. By formulating two hypotheses -the gender role and the sectorial composition hypothesis-we find that women are being severely affected by the current pandemic economic crisis both due to their traditional role as mothers and wives but also due to their prevalence in the hardest hit sectors such as accommodation and food services

Women in international careers : at the crossroads of barriers, challenges and opportunities

This article seeks to expand the knowledge available on the motivations, constraints, opportunities and experiences of women occupying international managerial positions, either as expatriates or in autonomous professional projects. A qualitative methodology was adopted. A total of 20 in-depth interviews were conducted with women in international careers. Family-related factors are the most common barriers to women taking advantage of opportunities and experiences abroad. Inspired by an earlier article (Mathur-Helm, 2002), women’s international managerial experiences are represented here as standing at a crossroads, at the point of intersection of different, challenges and opportunities. The decision to move abroad and the mobility process are experienced as a complex and ambivalent path: a crossroads where both positive and negative paths intersect with each other and a labyrinth where pleasures derived from work, self-fulfilment, work-family conflicts and personal pain are closely intertwined in their experiences.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Estimating Listeria monocytogenes growth in ready-to-eat chicken salad using a challenge test for quantitative microbial risk assessment

Research Areas: Public, Environmental & Occupational Health ; Mathematics ; Mathematical Methods In Social SciencesCurrently, there is a growing preference for convenience food products, such as ready-toeat (RTE) foods, associated with long refrigerated shelf-lives, not requiring a heat treatment prior to consumption. Because Listeria monocytogenes is able to grow at refrigeration temperatures, inconsistent temperatures during production, distribution, and at consumer’s household may allow for the pathogen to thrive, reaching unsafe limits. L. monocytogenes is the causative agent of listeriosis, a rare but severe human illness, with high fatality rates, transmitted almost exclusively by food consumption. With the aim of assessing the quantitative microbial risk of L. monocytogenes in RTE chicken salads, a challenge test was performed. Salads were inoculated with a three-strain mixture of cold-adapted L. monocytogenes and stored at 4, 12, and 16 °C for eight days. Results revealed that the salad was able to support L. monocytogenes’ growth, even at refrigeration temperatures. The Baranyi primary model was fitted to microbiological data to estimate the pathogen’s growth kinetic parameters. Temperature effect on the maximum specific growth rate (μmax) was modeled using a square-root-type model. Storage temperature significantly influenced μmax of L. monocytogenes (p < 0.05). These predicted growth models for L. monocytogenes were subsequently used to develop a quantitative microbial risk assessment, estimating a median number of 0.00008726 listeriosis cases per year linked to the consumption of these RTE salads. Sensitivity analysis considering different time–temperature scenarios indicated a very low median risk per portion (<−7 log), even if the assessed RTE chicken salad was kept in abuse storage conditions.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

El turismo ibérico: un estudio de la afluencia turística

La importancia del Turismo en el contexto económico europeo es, en la actualidad, un importante motor de desarrollo e impulso para muchos otros sectores de la Economía. Las alteraciones demográficas, la mejoría de los niveles de calidad de vida, la evolución de los transportes y la globalización, han sido factores determinantes en el crecimiento de la actividad turística. Caracterizada por la diversidad de atracciones y por una elevada calidad en sus servicios de turismo, la Europa es hoy el principal destino turístico del mundo. En el contexto ibérico, esta realidad no es diferente. En España y Portugal, el Turismo es hoy un sector transversal, con implicaciones en muchas otras actividades económicas. Asume pues extrema importancia la caracterización de las estructuras de afluencia turística en las diversas regiones de España y Portugal, con vista al mejoramiento y adaptación de la oferta, a un perfil de turista específico. En este estudio se ha procedido a una caracterización de la estructura de la afluencia turística en las diferentes regiones ibéricas, según la proveniencia geográfica de los turistas que mayoritariamente las visitan.he importance of the Tourism in the European economic context is, at the present time, an important development motor and pulse for many other sections of the Economy. The demographic alterations, the improvement of the levels of life quality, the evolution of transports and the globalization, have been decisive factors in the growth of the tourist activity. Characterized by the diversity of attractions anda high quality in its services of tourism, Europe is toda y the main tourist destiny of the world. In the Iberian context, this reality is not different. In Spain and Portugal, the Tourism is toda y a traverse section, with implications in many other economic activities. lt assumes it carries toan extreme importance the characterization of the structures of tourist aftluence in the severa! areas of Spain and Portugal, with view to the improvement and adaptation of the offer, toa profile of specific tourist. In this study we proceed to a characterization of the structure of the tourist aftluence in the different Iberian areas, according to the tourists' geographical provenience that mainly visits them

Self-reported hearing loss in Portugal: a cross-sectional comparison using evidence from National Health Surveys 2005/2006 and 2014

A incapacidade auditiva atinge grande parte da população com mais de 65 anos, diminuindo a sua qualidade de vida. Por conseguinte, é essencial caracterizar a sua prevalência de modo a remover barreiras incapacitantes, e promover a participação dos indivíduos afetados na vida em sociedade. Utilizando a informação recolhida no âmbito do 5º Inquérito Nacional de Saúde em 2014, e os dados apurados relativamente ao 4º Inquérito Nacional de Saúde em 2005/2006, pretendeu-se estimar a prevalência de incapacidade auditiva na população portuguesa em 2014, analisar a sua evolução face a 2005/2006, e examinar as respetivas diferenças regionais. Os resultados do presente estudo revelam que a incapacidade auditiva afeta uma proporção considerável da população portuguesa, especialmente nos grupos etários mais elevados. A prevalência de incapacidade auditiva aumentou de 2005/2006 para 2014, e entre a maioria das regiões, sendo mais elevada na região Norte. As menores prevalências registaram-se na R.A. da Madeira, embora esta região, conjuntamente com a R.A. dos Açores tenha sido a que registou um maior aumento proporcional da prevalência de incapacidade auditiva.Hearing impairment affects a large part of the population over 65 year old, diminishing their life quality. Therefore, it is crucial to examine the prevalence of hearing impairment, in order to remove disabling barriers and promote social inclusion. By using data gathered for the 5th National Health Survey in 2014, and data gathered for the 4th National Health Survey in 2005/2006, this study aimed to estimate the prevalence of hearing impairment in the Portuguese population in 2014, analyse its evolution against 2005/2006, and examine regional differences. Through the two years under analysis, it can be seen that hearing impairment affects a considerable proportion of the Portuguese population, especially in higher age groups. The prevalence of hearing impairment increased from 2005/2006 to 2014, and between most regions, being higher in the North. The lowest prevalence was recorded in Madeira, although this region, together with Azores, was the one with highest proportional increase in hearing impairment prevalence.info:eu-repo/semantics/publishedVersio